Area: Patogenia | Nro de orden: 33
Modulación de la vía de NFkB por el dominio Metiltransferasa de la proteína NS5 del virus de dengue
Gonzalez Lopez Ledesma, MM(1); Costa Navarro, GS(1); Pallarés, HM(1); Iglesias, NG(1); De Maio1, FA(1); Rajsbaum, R(2); Gamarnik, AV(1).
(1) Laboratorio de Virología Molecular. Fundación Instituto Leloir-CONICET, Buenos Aires, Argentina; (2) Department of Microbiology and Immunology, University of Texas Medical Branch, Galveston, USA.
Contacto: mgonzalezlopez@leloir.org.ar
El virus de dengue (DENV) es uno de los patógenos humanos más relevantes transmitidos por insectos; es responsable de 390 millones de infecciones anuales a nivel mundial. Es un virus de ARN de simple cadena positiva, perteneciente al género . La proteína NS5 de los flavivirus juega múltiples funciones durante la infección viral: es responsable de la síntesis del ARN viral y de contrarrestar la respuesta celular antiviral. Con el fin de investigar la interacción de NS5 con componentes celulares, se realizaron estudios de proteómica utilizando al DENV marcado con un tag en el extremo carboxi terminal de NS5. Se identificaron 53 proteínas celulares que se unen o forman complejos con NS5. Entre ellas se detectaron proteínas con actividad antiviral, como STAT2, un factor que participa en la vía de señalización de interferón, y que es degradado durante la infección viral al unirse a NS5 (Ashour et al. J Virol 2009). Asimismo se encontró una proteína, ERC1, que al ser silenciada incrementa la replicación viral. Para esclarecer el mecanismo de acción de ERC1 se evaluaron sus niveles en la infección viral, los cuales se vieron significativamente reducidos por western blot y citometría de flujo. Se logró determinar que ERC1 es degradada vía proteasoma y que dicha degradación es mediada por UBR4, una E3 ligasa identificada en el proteoma de NS5. Para validar el rol de NS5 en este proceso, se transfectaron células con plásmidos de expresión y se demostró que NS5 es suficiente para la degradación de ERC1. NS5 tiene dos dominios definidos, Polimerasa y Metiltransferasa, los cuales fueron expresados por separado. Ello nos permitió demostrar que la Metiltransferasa es el responsable de inducir la degradación de ERC1. ERC1 es una proteína de andamiaje, con múltiples funciones dentro de la célula, entre las que se destaca su rol en la activación de la vía de NFkB (Wu ZH et al. Mol Cell 2010). Frente a distintos estímulos, NFkB induce la expresión de citoquinas proinflamatorias, las cuales juegan un papel fundamental en los casos de dengue grave. Por ende, mediante ensayos de sobreexpresión y silenciamiento de ERC1, se corroboró su rol en la activación de NFkB. Dicha activación es también necesaria para la inducción de interferón. Acorde con ello, se observó que durante la infección viral, los niveles de expresión de citoquinas proinflamatorias e interferón eran menores en aquellas células silenciadas para ERC1 respecto a las no silenciadas. Por ende, al inducir menos citoquinas e interferón, la ausencia de ERC1 generaría una ambiente más favorable para la replicación viral. Este estudio revela el mecanismo por el cual ERC1 es degradada durante la infección viral, así como su función antiviral. Dado que ERC1 tiene múltiples funciones en la célula, su degradación abre un abanico de posibilidades respecto a las consecuencias que podría traer su ausencia en las células infectadas, tanto como .
