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Area: Antivirales, Inmunidad y Vacunas | Nro de orden: 16

Desarrollo de un vector adenoviral que dirige la formación de cápsides virales vacías del Virus de la Fiebre Aftosa serotipo O.

Ziraldo, M(1); Bidart, J(2); Mattion, N(1); Zamorano, P(2); D’Antuono, A(1)

(1) Centro de Virología Animal (CEVAN)-CONICET; (2) Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA-Castelar)

Contacto: micaela.ziraldo@gmail.com

Considerada por la Organización Mundial de Sanidad Animal como la principal enfermedad animal de declaración obligatoria, la fiebre aftosa (FA) es una epizootia que afecta a una amplia variedad de animales de interés pecuario, cuyo agente etiológico es el virus de la fiebre aftosa (VFA). Brotes recientes en países libres de FA resaltan la necesidad de nuevas vacunas que induzcan inmunidad temprana, no requieran el cultivo de VFA infectivo y confieran un amplio espectro de protección. Teniendo en cuenta que las partículas tipo virus (VLP) representan antígenos atractivos, ya que conservan todo el repertorio de epitopes conformacionales careciendo de infectividad, el objetivo del presente trabajo fue desarrollar un Ad optimizado que dirigiera la generación de partículas tipo virus del VFA cepa O1Campos y que sea capaz de inducir inmunidad protectora contra el desafío homólogo en modelo murino. Así se desarrolló el Ad[P]VP2 que contiene el cassette de expresión P12A3C del VFA clonado en sentido inverso al genoma adenoviral (3’-5’), e incluye mutaciones puntuales en la secuencia que codifica la proteína capsidal VP2, específicamente las sustituciones S93F e Y98F en residuos involucrados en la interacción entre pentámeros de la cápside del VFA. Mediante western blot de extractos de células infectadas con Ad[P]VP2 se verificó que dicho vector dirige la expresión y el correcto procesamiento de las proteínas capsidales VP1 y VP3 del VFA. Por medio de experimentos de ELISA a lo largo de gradientes de sacarosa se determinó que las subunidades del VFA expresadas se asociaron mayoritariamente formando complejos con un coeficiente de sedimentación de 20S. Además se evidenció la presencia de un componente minoritario con un coeficiente de sedimentación similar al de las VLP nativas del VFA (75S). El análisis mediante microscopía electrónica permitió confirmar que dicho material corresponde efectivamente a VLP del VFA. Finalmente se evaluó la inmunogenicidad y la capacidad protectora del nuevo candidato en modelo murino. Para ello, ratones BALB/c recibieron una dosis de la vacuna a virus inactivado comercial o dos de Ad[P]VP2. En animales inoculados con Ad[P]VP2 se determinaron títulos de anticuerpos totales (4,5±0,15) y neutralizantes (1,45±0,03) contra el VFA, similares a los estimados en el grupo que recibió vacuna convencional. Interesantemente el nuevo candidato logró proteger al 90% de los animales inoculados. En conclusión, se logró desarrollar un Ad que dirige la expresión de altos niveles de subunidades del VFA cepa O1Campos, donde una proporción es capaz de autoensamblarse y formar partículas tipo virus. Además, el candidato desarrollado es capaz de inducir una respuesta inmune efectiva permitiendo alcanzar un nivel de protección del 90%, sin incluir ningún adyuvante, en pruebas de desafío homólogo en modelo murino.