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CARACTERIZACIÓN MICROSCÓPICA DE LA OXIDACIÓN DE MANGANESO Y LA FORMACIÓN DE BIOFILMS EN BACTERIAS DE INTERÉS BIOTECNOLÓGICO

PIAZZA, Ainelen | CIANCIO CASALINI, Lucila | SERRA, Diego Omar | OTTADO, Jorgelina | GOTTIG, Natalia

INSTITUTO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CELULAR DE ROSARIO (IBR-CONICET, FBIOYF, UNR)

Introducción y Objetivos:
Las biopelículas se conocen comúnmente como poblaciones de microorganismos unidos a una superficie dada, pueden formarse por una única o múltiples especies de organismos y constituye una estrategia de supervivencia. Las condiciones de crecimiento promueven cambios en las actividades enzimáticas microbianas que pueden alterar su organización estructural. En estudios previos, se observó que el desarrollo de biopelículas de Pseudomonas veronii 2E sobre vidrio en cultivos estáticos se perturba de acuerdo a cambios nutricionales y temperatura de incubación. Conocer cómo es la estructura de la biopelícula de P. veronii 2E es esencial para desarrollar y optimizar biorreactores para remediar efluentes contaminados con metales. El objetivo del presente trabajo es estudiar las características de células aisladas observadas en biopelículas desarrolladas por P. veronii 2E sobre vidrio bajo diferentes condiciones de cultivo mediante la adquisición de imágenes y su procesamiento posterior con el programa ImageJ®.
Materiales y Métodos:
Se estudió la cinética de formación de biopelículas sobre cubreobjetos en microplacas de 6 cavidades con 3,0 ml de cada medio de cultivo base con diferentes fuentes de carbono. Se trabajó con dos medios de cultivos base, un medio mínimo salino y un medio complejo. Se extrajeron los cubreobjetos a 4 tiempos de muestreo (de 0 a 55 h), luego de teñir con violeta cristal, se observaron por microscopia de campo claro y se adquirieron las imágenes a cada tiempo y condición. Dichas imágenes se analizaron digitalmente con el programa ImageJ® para identificar células aisladas a partir del reconocimiento de partículas, seleccionando, en pixeles, las partículas de menor tamaño (entre 20 y 200). Sobre este conjunto inicial, se estudió la dispersión en los tamaños de las partículas y se acotó el rango al de mayor frecuencia. Se analizaron diferentes parámetros característicos (como el área promedio o la longitud y ancho promedios) al conjunto de partículas seleccionado.
Resultados:
El tamaño de las células aisladas (determinado por el área cubierta, el largo y ancho de cada célula) inmovilizadas en los cubreobjetos cambió conforme variaron las condiciones nutricionales. Se halló una diferencia del 50% mayor en el tamaño celular al comparar el crecimiento con medios complejos respecto del crecimiento con medios mínimos. Por otro lado, con los medios complejos y glucosa como fuente de carbono se halló una disminución del tamaño celular en función del tiempo, mientras que, con medios mínimos, el tamaño celular prácticamente no varió en función del tiempo.
Conclusiones:
La aplicación del ImageJ® permitió determinar que el tamaño y características de las células aisladas identificadas en biopelículas de P. veronii 2E está determinada por las condiciones nutricionales. Estos resultados refuerzan y complementan los obtenidos previamente en cuanto a la cobertura de la superficie por parte de la biopelícula.