Aislamiento y caracterización de VEP derivadas del medio condicionado de la membrana amniótica humana:una aproximación sobre sus efectos antitumorales

Luciano Ángel Perez ¹ - Mabel Cecilia Bonardi ¹ - Diego Santa Cruz ² - Rodrigo Nicolas Riedel ¹ - Mariana Jaime ³ - Roberto Casale ³ - Cecilia Varone ¹ - Natalia Pacienza ² - Julieta Maymó ¹

1 IQUIBICEN, CONICET, Departamento de Química Biológica, FCEN, UBA. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
2 IMeTTyB (CONICET - Fundación Favaloro), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
3 Departamento de Maternidad, Hospital Posadas, Buenos Aires, Argentina.

Se ha demostrado que las células madre derivadas de la membrana amniótica humana (hMA) presentan efectos antitumorales, atribuibles a sus propiedades antiproliferativas, antiangiogénicas y proapoptóticas, posiblemente mediadas por vesículas extracelulares (VEs). Dado que el hepatocarcinoma constituye la tercera causa de mortalidad oncológica a nivel mundial, resulta esencial desarrollar nuevas estrategias terapéuticas. Estudios previos de nuestro grupo de trabajo, han demostrado que el medio condicionado de membrana amniótica (MC-MA) inhibe la proliferación y promueve la apoptosis en células de hepatocarcinoma. El presente trabajo se centró en el aislamiento y caracterización de VEs del MC-MA, así como en la evaluación de su efecto sobre la viabilidad celular. Las VEs se aislaron mediante cromatografía de intercambio aniónico. Se cuantificaron proteínas (Bradford) y lípidos (sulfo-fosfo-vanillina) y se evaluó la expresión de TSG101 y Calnexina por WB, así como CD63 por ELISA. La morfología de las VEs se evaluó por microscopía electrónica de transmisión (MET) y su concentración mediante el análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA). El efecto sobre la viabilidad en líneas HepG2 y Huh-7 fue analizado a través del ensayo MTT según dosaje proteico y número de partículas. La fracción 4 mostró los mayores niveles de proteínas, lípidos y CD63. El WB confirmó la presencia de TSG101 y ausencia de Calnexina. La TEM reveló VEs esféricas con un tamaño promedio de 66 nm; el NTA indicó un diámetro medio de 165 nm y una concentración de aproximadamente 10¹⁰ partículas/ml (n=3), lo que sugiere un enriquecimiento de VEs pequeñas en el MC-MA. A 0.1–10 µg/ml, el ensayo MTT no mostró cambios en la viabilidad celular a las 24 horas. Con 10⁷–10⁹ NP/ml, la viabilidad aumentó a las 24 horas y disminuyó a las 48 horas en HepG2. Esto confirma VEs pequeñas en MC-MA y subraya la necesidad de estudios adicionales para evaluar su potencial terapéutico en hepatocarcinoma.