ESTRATEGIAS INNOVADORAS PARA LA EXHIBICIÓN DE PROTEÍNAS FUNCIONALES EN BACTERIAS ÁCIDO LÁCTICAS SIN MODIFICACIÓN GENÉTICA

Iara Gabriela Jastrebow ^1,2 - Tania Belén Gordillo ^1,2 - Sabrina Sol Bockor ^1,2 - Sol Guaita ¹ - Julia Alonso Suarez ¹ - Mariana Claudia Allievi ^1,2 - María Mercedes Palomino ^1,2

1 DQB, FCEN, UBA; 2 IQUIBICEN-CONICET, FCEN, UBA

Las proteínas de S-Layer prometen ser una gran herramienta de anclaje para desarrollar sistemas de display en la superficie de bacterias probióticas, como Lactobacillus acidophilus ATCC 4356. En esta especie, la principal proteína de S-Layer, SlpA, presenta una estructura bi-modular con dos dominios funcionales, el N-terminal y el C-terminal (CT), el cual posee dos dominios SLAP en tándem, y que estarían involucrados en la unión a la superficie celular.
El objetivo del trabajo es realizar una evaluación funcional del CT de SlpA para ser usado como carrier en la exhibición de proteínas heterólogas funcionales en la superficie de bacterias ácido lácticas, que podrían, luego, entregarse en forma de yogur.
Para ello, se clonaron SLAP1, SLAP2 y CTSlpA en quimeras con la proteína verde fluorescente (GFP) en sistemas heterólogos de Escherichia coli. Purificados los distintos fragmentos, se realizaron ensayos de binding con L. acidophilus para evaluar la unión mediante citometría de flujo y microscopía de fluorescencia. Los resultados indicaron que el fragmento SLAP1 por sí solo no es suficiente para lograr la decoración de las bacterias. Adicionalmente, se evaluó la viabilidad de las células probióticas decoradas en ensayos de preservación a 4°C, los cuales demostraron que la decoración con GFP-CTSlpA incrementa significativamente la supervivencia de Lactobacillus acidophilus durante el almacenamiento en refrigeración.
Estos avances destacan el potencial de las proteínas de S-Layer como herramienta para la exhibición de proteínas funcionales en bacterias probióticas sin necesidad de modificación genética, conservando su estatus GRAS.