CARACTERIZACIÓN DE LOS PROTEOMAS ESPECÍFICOS ASOCIADOS A LAS ISOFORMAS CATALÍTICAS DE LA PKA EN CÉLULAS QUIESCENTES DE SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Godoy Alan - Valacco Pía - Fernandez Germán - Moreno Silvia - Ortolá-Martínez María Clara - Galello Fiorella - Rossi Silvia - Portela Paula

Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, IQUIBICEN, CONICET

Ante la falta de nutrientes, las células de Saccharomyces cerevisiae pausan el ciclo celular y entran en un estado quiescente reversible que les permite sobrevivir y reanudar el crecimiento cuando los nutrientes vuelven a estar disponibles. La proteína quinasa A (PKA) señaliza la disponibilidad de nutrientes y, de esta manera, regula tanto el establecimiento de la quiescencia y el crecimiento. Durante la quiescencia, Tpk1 y Bcy1 presentan localización núcleo-citoplasmática difusa, mientras que Tpk2 y Tpk3 se acumulan en focos citoplasmáticos que colocalizan parcialmente con cuerpos de procesamiento del RNA (PBs) y gránulos de estrés (SGs). En este trabajo, identificamos los proteomas asociados a Tpk1, Tpk2 y Tpk3 en levaduras quiescentes empleando nanoLC-MS/MS label-free quantification. Hemos identificado 99 proteínas asociadas a Tpk1, 82 a Tpk2 y 25 a Tpk3. Para investigar las funciones biológicas de las proteínas identificadas se analizaron posibles sobre-representaciones de términos de Ontología Génica (GO).Estos análisis revelaron enriquecimientos significativos en procesos biológicos y componentes celulares específicos para cada isoforma catalítica.Los términos GO enriquecidos fueron: para Tpk1, complejos TOR, Seh1 y snoRNPs; para Tpk2, glucólisis, ciclo TCA, sintetasas de tRNA y complejo 48S; para Tpk3, proteasoma, ribosoma, complejo 43S y SGs. Además, hemos encontrado pocas proteínas en común al comparar las proteínas identificadas en nuestro estudio con los proteomas asociados a complejos ribonucleoproteicos inducidos por varios tipos de estrés (hambreado de glucosa, térmico y oxidativo) y los proteomas asociados a Bcy1. Se halló que 12–25% del proteoma identificado presentaba motivos PKA RRxS/T o RKxS/T. Nuestros hallazgos sugieren que la localización de cada isoforma de Tpk en células quiescentes está determinada por una red de interacciones proteicas distinta, un mecanismo que podría contribuir a la especificidad de cada subunidad catalítica de PKA.