Ligandos de receptores tipo Toll con actividad antiviral frente a la infección de adenovirus in vitro

Maria Sol Ferrari Poquet ¹ - Josefina Vicente ^1,2 - Freddy Armando Peñaranda Figueredo ^1,2 - Andrea Alejandra Barquero ^1,2 - Carlos Alberto Bueno ^1,2

1 Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Departamento de Química Biológica, Laboratorio de Virología, Buenos Aires, Argentina;
2 CONICET - Universidad de Buenos Aires. Instituto de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (IQUIBICEN). Buenos Aires, Argentina.

Las infecciones por adenovirus son una causa importante de morbilidad y mortalidadar y pueden derivar en bronquiolitis o neumonía. Además, AdV representa la mayoría de los casos de conjuntivitis. A pesar de esto, no existen antivirales ni vacunas específicas contra estos. Los agonistas de los Receptores tipo Toll (TLR), capaces de activar la respuesta inmune innata, han sido propuestos como posibles agentes antivirales. Estudios previos de nuestro laboratorio demostraron que el imiquimod (IMQ), agonista de TLR7, presenta actividad antiviral frente al virus sincicial respiratorio (RSV) y frente a coronavirus in vitro.
El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad antiviral de ligandos de TLR frente al AdV en células relevantes para las patologías inducidas por el virus. La citotoxicidad se analizó mediante MTT en células A549 (epiteliales pulmonares humanas) y NHC (epiteliales de conjuntiva humana) usando concentraciones entre 1 y 200 µg/ml. La actividad antiviral se determinó mediante un ensayo de inhibición del rendimiento viral y la expresión de E1A y Hexón se evaluó por Inmunofluorescencia Indirecta.
Las células infectadas con AdV se trataron con Pam2CSK4 (TLR2/6), poly(I:C) (TLR3), LPS (TLR4), IMQ (TLR7), resiquimod (TLR7/8) y CpG ODN (TLR9). Solo IMQ redujo significativamente y de manera dependiente de la concentración los títulos virales a las 24 y 48 h post infección, sin mostrar toxicidad en ninguna de las concentraciones evaluadas. Además, disminuyó la expresión de E1A y Hexón en células infectadas.
IMQ no mostró actividad virucida y los ensayos de pretratamiento, adsorción e internalización indicaron que solo actúa cuando se administra post infección. Los estudios de tiempo de adición y remoción demostraron que IMQ inhibe la formación de partículas infecciosas incluso al añadirse hasta 12 h p.i., y que su efecto se mantiene aun al retirarlo desde las 20 h p.i. En conjunto, IMQ inhibe etapas tardías del ciclo viral sin causar citotoxicidad.