Caracterización de proteínas de Candidatus liberibacter asiaticus, patógeno de cítricos, y su aplicación en diagnóstico.

Daniela Militello ^1,3 - Javier Santos ^2,3,4 - Lorena Itatì Ibañez ^1,3

1 Laboratorio de Ingeniería de Anticuerpos. Instituto de Química Física de los Materiales, Medio Ambiente y Energía (INQUIMAE), Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
2 Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular, Instituto de Biociencias, Biotecnología y Biología Traslacional (iB3), Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
3 Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas (CONICET), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.
4 Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

La enfermedad de HLB es causada por bacterias del género Candidatus Liberibacter spp. (CaLib). Representa una seria amenaza para la citricultura mundial, ya que provoca un rápido decaimiento y acorta la vida útil de las plantas infectadas. Se ha detectado en la mayoría de los países productores de cítricos, y su dispersión constituye un grave problema para los productores argentinos. No existen tratamientos efectivos ni variedades resistentes, y las plantas infectadas pueden permanecer asintomáticas durante largos períodos, dificultando su detección. Las técnicas diagnósticas actuales son la inspección visual, que no permite un diagnóstico certero, y la detección por PCR, que requiere personal especializado y equipamiento costoso. Por ello, el desarrollo de métodos inmunológicos simples y de bajo costo representaría un avance importante. Los nanoanticuerpos (NAcs) son fragmentos de anticuerpo de dominio único obtenidos de camélidos, son pequeños, estables, económicos de producir en E. coli y capaces de reconocer diferentes antígenos con gran afinidad.
Los objetivos de este trabajo son caracterizar proteínas de CaLib mediante técnicas biofísicas y seleccionar NAcs específicos para su detección. Los NAcs serán utilizados para desarrollar kits diagnósticos y herramientas útiles para estudiar la bacteria y la enfermedad.
Expresamos e inmunizamos tres proteínas de CaLib, LotP (factor de transcripción), CLIBASIA_05315 (inhibidor de cisteín-proteasas) y SC2_gp095 (peroxidasa). Generamos dos bibliotecas de NAcs a partir de las cuales se seleccionaron NAcs específicos para dichas proteínas. Las secuencias codificantes de estos NAcs fueron clonadas en vectores que permiten su modificación acoplándolos a la proteína fosfatasa alcalina y para generar NAcs bivalentes. Los NAcs modificados serán utilizados para el desarrollo de los mencionados sistemas de estudio y diagnóstico del patógeno.