Exclusión de la sobreinfección de cultivos celulares por Trypanosoma cruzi

Celina M Gonzalez ¹ - Juan Burgos ^2,3 - Guillermo Di Mario ² - Martín Edreira ^1,2,4 - Daniel Musikant ^1,2

1Departamento de Química Biológica – Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA)
2 IQUIBICEN (UBA- CONICET)
3 Instituto de Biotecnología – (UNSAM- CONICET)
4 Department of Pharmacology and Chemical Biology - University of Pittsburgh

Como parásito intracelular obligado, T. cruzi replica en el citoplasma hospedador y explota estrategias de invasión para formar la vacuola parasitófora (PV). Resultados previos muestran un rápido reclutamiento de autofagosomas y LC3 al sitio de entrada, en línea con el rol de vesículas endocíticas/lisosomales y la maquinaria del exocisto en la biogénesis de la PV. Además, demostramos que la activación de la vía AMPc/Epac1/Rap1b/Ral-GDS favorece la invasión; Ral-GDS promueve la autofagia en cardiomiocitos y su efector RalB media el ensamblaje de autofagosomas.
En este contexto, profundizamos la participación de la autofagia en la invasión. Usando células LC3-GFP observamos un aumento de fluorescencia a tiempos cortos de infección con dos cepas de distinto DTU. Sin embargo, a tiempos largos (24-48hs), hubo una marcada inhibición de la autofagia en células infectadas respecto a las no infectadas. Hipotetizamos que, siendo la autofagia una vía de entrada, su inhibición evitaría la sobreinfección.
Para confirmarlo, usamos parásitos transgénicos (Y-GFP y Sylvio-mCherry). En invasión mixta simultánea no hubo diferencias en co-infección. Sin embargo, al incubar primero con Y-GFP y luego desafiar con Sylvio-mCherry, la co-infección disminuyó significativamente respecto a la infección simple. Así, la exclusión a la sobreinfección podría estar mediada por la inhibición de la autofagia. Actualmente evaluamos si FoxO1, factor de transcripción de genes de autofagia, es responsable de esta inhibición.