Evaluación del efecto de imiquimod sobre la dinámica lisosomal en células endoteliales asociadas a patologías vasculares pediátricas

Carolina Bigiolli ^1,2 - Soledad Porte Alcón ² - Silvina Gazzaniga ¹

1 Lab. QB63, Dpto.Química Biológica, FCEyN, UBA
2 Lab. QB80, Dpto.Química Biológica, FCEyN, UBA

Los hemangiomas infantiles son el tumor vascular más frecuente en la infancia. Se caracterizan por una angiogénesis no regulada y un comportamiento endotelial aberrante. Si bien la mayoría involuciona espontáneamente luego de un crecimiento rápido en los primeros meses, existe un porcentaje que desarrollan complicaciones graves, tales como pérdida de visión, insuficiencia cardíaca o deterioro neurológico. Actualmente, no existe un enfoque terapéutico inocuo para pacientes pediátricos, por lo que el reposicionamiento de imiquimod (IQ) podría resultar una alternativa de interés. IQ es un agonista de los receptores TLR cuyo uso se encuentra aprobado para el tratamiento de otras patologías cutáneas. Además de su efecto inmunomodulador, la citotoxicidad de IQ sobre células transformadas podría relacionarse con alteraciones lisosomales en patologías vasculares pediátricas. En estudios previos, demostramos que IQ actúa como un disruptor de la homeostasis redox, desencadenando la muerte celular debido al daño oxidativo generado. Nuestra hipótesis es que el estrés oxidativo producido por IQ en células de hemangioma conduce a una permeabilización de la membrana lisosomal, contribuyendo a la muerte celular. El objetivo de nuestro trabajo es estudiar la dinámica y la permeabilización lisosomal en respuesta al IQ. Resultados preliminares en células H5V de hemangioma murino marcadas con Lysotracker Red DND-99 sugieren que IQ altera la distribución, número y tamaño de las vesículas ácidas. En particular, la exposición a 10 μg/ml IQ por 4 h resultó en una acumulación de lisosomas de gran tamaño en la región perinuclear. Además, se observó difusión de la sonda al citosol, indicando un posible daño a la membrana lisosomal. En concordancia con este resultado, en estas mismas condiciones se detectó una disminución ≈40% en los niveles lisosomales de catepsina D, respecto al control (western blot). Estos estudios serán de utilidad para comprender el efecto citotóxico no canónico de IQ.