P37 - Reproducción

Incorporación de vesículas extracelulares en espermatozoides ovinos y su rol en la regulación de la capacitación espermática

Armani, Tomás ¹ - Nicolli AR¹ - Iniesta-Cuerda M² - Picazo-Córdoba MC ² - Vidal-Garcia C² - Bóveda-Gómez P² - Laborda JA² - Serrallé M² - Díaz-Hernández E² - Soler-Valls AJ²* - Cesari A¹*

1) Instituto de Investigaciones Biológicas, CONICET-UNMdP, Argentina.
2) Grupo SaBio (CSIC-UCLM-JCCM). ETSIAMB. Universidad de Castilla-La Mancha, Albacete, España.
Contacto: tomasarmani@mdp.edu.ar

El plasma seminal (PS) rodea a los espermatozoides y contiene componentes clave para la regulación de procesos como la capacitación espermática. Entre ellos, las vesículas extracelulares del plasma seminal (VEs-PS) podrían tener un rol relevante al transportar proteínas, lípidos y otras moléculas. El objetivo de este estudio fue evaluar la incorporación de VEs-PS en espermatozoides ovinos y su efecto sobre la capacitación espermática. Las VEs se aislaron mediante ultracentrifugación (UC) y cromatografía de exclusión por tamaño (SEC), obteniéndose dos fracciones (P1 y P2). Se confirmó la presencia de marcadores canónicos (CD9, CD63 y CD81) por WB y la ausencia de calnexina indicó escasa contaminación citoplasmática. Las concentraciones proteicas en la fracciones de VEs fueron mayores para UC y SEC-P1 que para SEC-P2. Las presencia de VEs no afectó la viabilidad espermática. Posteriormente, las VEs se marcaron con CFSE y se incubaron con espermatozoides a diferentes tiempos (5, 15, 30 y 60 minutos). Se observó por microscopía confocal incorporación de marca en los espermatozoides en distintas regiones desde los 5 minutos de incubación, que perduraron durante el ensayo. Mediante citometría de flujo se observó un aumento significativo en la proporción de células marcadas con SEC-P1 a los 5 minutos, y a partir de los 15 minutos para el resto de las fracciones. Finalmente, se analizó el impacto de las VEs-PS sobre eventos moleculares relacionados al proceso de capacitación. SEC-P2 moduló la fosforilación de residuos tirosina (pY) donde los espermatozoides incubados con esta fracción presentaron un perfil de pY similar a condiciones no capacitantes. Sin embargo, la actividad de la proteína quinasa A, no se vio afectada por ninguna de las VEs. En conjunto, estos resultados sugieren que las fracciones enriquecidas en VEs-PS interactúan con los espermatozoides de manera rápida, mostrando en el caso de SEC-P2 posibles efectos sobre la capacitación.

Palabras clave: VESÍCULAS EXTRACELULARES - PLASMA SEMINAL - OVINO - CAPACITACIÓN ESPERMÁTICA - CFSE