P33 - Neurociencia

Rol de las vesículas extracelulares de astrocitos sobre la expresión génica de motoneuronas en la Esclerosis Lateral Amiotrófica (ELA).

Calero, Eugenia - Marton, Soledad - Cassina, Patricia

Unidad Académica de Histología y Embriología, Facultad de Medicina, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay.
Contacto: ecalero@fcien.edu.uy

La esclerosis lateral amiotrófica (ELA) es una enfermedad neurodegenerativa fatal que afecta a las motoneuronas (MNs) y carece de terapias efectivas. Se ha demostrado que los astrocitos contribuyen a su progresión: MNs co-cultivadas con astrocitos que sobreexpresan la Superóxido Dismutasa humana mutada (hSOD1G93A) presentan menor sobrevida. Sin embargo, se desconocen los mecanismos moleculares que conducen a la muerte neuronal. Astrocitos hSOD1G93A liberan vesículas extracelulares (VEs) que reducen la viabilidad de las MNs, en comparación con las VEs de astrocitos no transgénicos (no-Tg), mostrando perfiles diferenciales de microARNs identificados experimentalmente, cuyo impacto sobre la expresión génica neuronal se desconoce.
Nos encontramos realizando un proyecto en cual el objetivo general es analizar la expresión génica de MNs sin tratar (control), tratadas con VEs de astrocitos no-Tg y hSOD1G93A mediante secuenciación masiva.
Para ello, realizamos cultivos primarios de astrocitos de rata no-Tg y hSOD1G93A, obteniendo medios condicionados a partir de los cuales se aisló una fracción enriquecida en VEs por filtración y exclusión molecular. Las VEs de la fracción se cuantificaron mediante Sensado de Resistencia al Pulso por Microfluidos (MRSP). Igualmente, realizamos cultivos primarios de MNs espinales y evaluamos su sobrevida en ausencia y presencia de dichas VEs.
A futuro, realizaremos RNA-seq para identificar cambios transcriptómicos y determinaremos si los ARNm diferencialmente expresados son blancos potenciales de microARNs presentes en VEs SOD1G93A, analizando su regulación post-transcripcional mediante Western Blot o inmunofluorescencia (IF), combinando tratamientos con VEs, miméticos y antagomiRs.
Asimismo, hemos tratado astrocitos con antimicina A (AA) para evaluar cambios en la cantidad de VEs y en niveles proteicos mediante WB e IF.
Este estudio aporta a la comprensión de la interacción astrocito-motoneurona en ELA a través de la liberación de EVs y los mecanismos moleculares de neurodegeneración, abriendo posibilidades para el desarrollo de terapias dirigidas basadas en microARNs y sus blancos.

Palabras clave: ELA, astrocitos, neurodegeneración, motoneuronas