P18 - Reproducción

Evaluación de métodos de aislamiento de vesículas extracelulares de plasma seminal y su efecto en la función espermática en humanos

Rio, Sofía¹ - Armani, Tomás² - Arroyo-Salvo, Camila¹ - Bogetti, María Eugenia¹ - Cesari, Andreina² - Pérez-Martínez, Silvina¹

1) Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos, CONICET-UBA, Argentina
2) Instituto de Investigaciones Biológicas, CONICET-UNMdP, Argentina
Contacto: srio@fmed.uba.ar

Las vesículas extracelulares (VEs) presentes en el plasma seminal humano (PS) han despertado gran interés por su posible rol en la modulación de la función espermática y la fertilidad masculina, debido a la gran variedad de biomoléculas que transportan. El objetivo de este estudio fue comparar tres métodos de aislamiento de VEs del PS de pacientes normozoospérmicos: 1) ultracentrifugación doble (UC)- 2) columna de exclusión por tamaño (SEC)- y 3) precipitación con polietilenglicol (PEG), y evaluar su efecto sobre la función espermática humana. Las VEs fueron caracterizadas mediante western blot (WB), microscopía electrónica de transmisión (TEM) y análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA). Los métodos SEC y UC permitieron el aislamiento de VEs. Evaluamos la incorporación de VEs marcadas con la sonda CFSE a los espermatozoides mediante citometría de flujo. Nuestros resultados indican que los espermatozoides incubados con VEs-SEC mostraron una mayor intensidad de fluorescencia media (IFM) que los incubados con VEs-UC (UC = 398 ± 100- SEC = 676 ± 167- media IFM ± SEM, p≤0.05). Además, determinamos el efecto de las VEs en eventos asociados a la capacitación espermática, como los niveles de proteínas fosforiladas en residuos tirosina (pY) (por WB), la concentración de calcio intracelular (Ca2+ i), el potencial de membrana (Em), la reacción acrosomal (por citometría de flujo) y la motilidad (mediante el sistema CASA). La co-incubación con VEs produjo una disminución en el porcentaje de espermatozoides que con reacción acrosomal espontánea, sin alterar el Ca2+i ni Em. Las VEs-SEC también disminuyeron pY, y la motilidad total y progresiva de los espermatozoides. Estos resultados indican que el método SEC es eficaz para aislar VEs funcionales del plasma seminal, que se incorporan a los espermatozoides y ejercen efectos fisiológicos, lo que sugiere un posible rol en la regulación de la adquisición de la capacidad fecundante.

Palabras clave: Vesículas extracelulares - plasma seminal - capacitación espermática - humano