P16 - Cáncer

Secreción de de vesículas extracelulares con componentes mitocondriales en la senescencia inducida por la quimioterapia en melanoma

Grünwaldt, Guillermo ¹ - Goñi, Magdalena ¹ - Fagúndez, Pablo ² - Tosar, Juan Pablo ^2,3 - Quijano, Celia ¹ - Martínez, Jennyfer ¹

1) Universidad de la República, Departamento de Bioquímica y Centro de Investigaciones Biomédicas (CEINBIO), Facultad de Medicina, Montevideo, Uruguay
2) Universidad de la República, Unidad de Bioquímica Analítica, Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Montevideo, Uruguay.
3) Universidad de la República, Unidad de Bioquímica Analítica, Centro de Investigaciones Nucleares, Facultad de Ciencias, Montevideo, Uruguay- Institut Pasteur de Montevideo, Laboratorio de Genómica Funcional, Montevideo, Uruguay.
Contacto: ggrunds@gmail.com

La quimioterapia y otros agentes que dañan el ADN pueden inducir senescencia tanto en células tumorales como no tumorales, y estas células senescentes se asocian a diversos efectos adversos del tratamiento. Se trata de células no proliferativas que secretan factores capaces de contribuir al desarrollo de múltiples patologías. Dentro de este secretoma senescente se incluyen biomoléculas solubles (proteínas, ácidos nucleicos, lípidos) y vesículas extracelulares (EVs).
Nuestro grupo investiga la senescencia inducida por temozolomida, un agente alquilante, en células de melanoma murino. Mediante proteómica shotgun caracterizamos el fenotipo secretor de las células senescentes e identificamos proteínas con propiedades inmunosupresoras, potencialmente implicadas en la progresión tumoral y en la respuesta a la quimioterapia. El análisis de enriquecimiento de vías mostró una representación significativa de compartimentos asociados a EVs y exosomas, lo que motivó evaluar su secreción en este modelo.
Las EVs se aislaron de células senescentes y no senescentes mediante cromatografía de exclusión por tamaño, y se caracterizaron en un analizador de partículas por pulsos resistivos (MRPS). Las células senescentes liberaron una mayor cantidad de EVs por célula que las control, con un tamaño predominante de 70–100 nm. El western blot confirmó la presencia de los marcadores CD81, TSG101 y ALIX en las fracciones con EVs. Además, detectamos componentes mitocondriales (como SDHa y ADN mitocondrial) en dichas fracciones.
En conjunto, nuestros resultados muestran que la senescencia inducida por temozolomida en células de melanoma se asocia a un aumento en la secreción de EVs y a la incorporación de proteínas y ADN mitocondrial en ellas, lo que sugiere que las células senescentes podrían liberar componentes mitocondriales (o incluso mitocondrias enteras) a través de estas vesículas. Estos hallazgos abren nuevas líneas de investigación sobre las propiedades de las EVs senescentes y su impacto en el microambiente tumoral.

Palabras clave: SENESCENCIA, MITOCONDRIA, VESÍCULAS EXTRACELULARES