P15 - Bacterias

Vesículas extracelulares de la cepa bacteriana 18: caracterización y estudio in vitro de su actividad en modelos celulares

Bustos Ruiz, Camila ¹ - Contreras, Héctor ² - Roberto, Elizondo ³ - García, Apolinaria ⁴

1) Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción - Concepción, Chile.
2) Facultad de Farmacia, Universidad de Concepción, Concepción, Chile.
3) Departamento de Biología Molecular, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile.
4) Departamento de microbiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad de Concepción, Concepción, Chile.
Contacto: camilbustos@udec.cl

Las vesículas extracelulares bacterianas (bEVs) son estructuras nanométricas liberadas al medio extracelular que contienen proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y metabolitos. Su implicancia en la modulación de la respuesta inmune y en la comunicación hospedero–microbiota ha despertado interés en su potencial uso en aplicaciones biomédicas. El presente trabajo busca aislar, caracterizar y evaluar el efecto de bEVs de una cepa bacterianas láctica de origen intestinal denominada C18 sobre un modelo celular epitelial gástrico humano (AGS), con énfasis en citotoxicidad e inmunomodulación.
Las bEVs se obtuvieron a partir de cultivos bacterianos en fase estacionaria (OD600 de 1.0), aplicando centrifugación diferencial, filtración estéril (0,22 µm), concentración mediante ultrafiltración y cromatografía de exclusión por tamaño (SEC) en columna Sephadex G200/40. La caracterización incluye determinación de tamaño y concentración por Nanoparticle Tracking Analysis (NTA), distribución y polidispersidad por dispersión de luz dinámica (DLS), potencial zeta, cuantificación proteica por método BSA y análisis morfológico mediante microscopía electrónica (TEM).
Para los ensayos funcionales, las células AGS serán tratadas con diferentes diluciones de las bEVs obtenidas. La citotoxicidad se evaluará por ensayo MTT y la inmunomodulación mediante cuantificación de citoquinas a través de Kit de citometría.
Como resultados preliminares, se logró aislar una población vesicular libre de restos celulares, con morfología esférica y doble capa lipídica observada por TEM. Los análisis iniciales de DLS detallan un tamaño de 43.3nm - 131.5nm.
Se espera confirmar el potencial eléctrico de las vesículas (Potencial Z), concentración (NTA) y la ausencia de citotoxicidad en las concentraciones de estudio y observar un perfil modulador sobre la expresión de citocinas inflamatorias en células AGS, lo que respaldaría el potencial de las bEVs bacterianas como herramientas inmunomoduladoras.

Palabras clave: Vesículas extracelulares bacterianas (bEVs), Microbiota intestinal, Inmunomodulación, Caracterización