P10 - Reproducción

Caracterización del prefil de vesículas extracelulares producidas por una línea celular de trofoblásto humano (SWAN-71)

Tosar Camila^1,2,3 - Muniz-Lago Ana Clara^1,2,3,4 - Núñez Victoria^1,2,3 - Mourglia-Ettlin Gustavo^1,2,3 - Arbildi Paula^1,2,3

1) Área Inmunología, Departamento de Biociencias (DEPBIO), Facultad de Química, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay
2) Unidad Asociada de Inmunología, Instituto de Química Biológica (IQB), Facultad de Ciencias, Universidad de la República
3) Departamento de Inmunología, Instituto de Higiene 'Prof. Arnoldo Berta', Universidad de la República<br>
4 Posgrado en Biotecnología, Facultad de Ciencias, Universidad de la República, Montevideo, Uruguay<br>
Contacto: camilatosar@gmail.com

La concentración de vesículas extracelulares (VEs) en la circulación materna aumenta durante el desarrollo del embarazo, siendo las mismas principalmente derivadas del trofoblasto. Estas VEs ejercen varias funciones, y su producción y composición depende del ambiente celular.

En el presente trabajo se evaluó la liberación basal in vitro de VEs producidas por el trofoblasto (en cultivos de una línea celular trofoblástica de primer trimestre, Swan-71) y el efecto de diferentes concentraciones de estímulos inflamatorios sobre esta liberación (TNF-alfa y antígenos solubles de Toxoplasma gondii). Para esto se optimizaron las condiciones experimentales para la purificación y caracterización de VEs, evaluando el área superficial de cultivo, el número de células, el tiempo de incubación, y la actividad metabólica celular en ausencia de suero fetal bovino.

El análisis cuanti-cualitativo de las VEs se realizó mediante Nanoparticle Tracking Analysis (NTA, ViewSizer 3000 HORIBA) y la viabilidad celular mediante ensayo de reducción de resazurina.

La viabilidad celular se mantuvo en todas las condiciones evaluadas, y se puso a punto un sistema de cultivo que permitió obtener concentraciones de VEs suficientes para su evaluación por NTA. La distribución de tamaño de VEs fue similar en todas las muestras (media: 120 nm), y no se vio afectada por la presencia de estímulos inflamatorios en ninguna de sus concentraciones. En condiciones basales la producción de VEs aumentó con el tiempo de incubación (10^7 partículas/mL a 24 h vs. 10^8 partículas/mL a 48 h). Las diferentes concentraciones de estímulos no afectaron la concentración de VEs liberadas.

En suma, se determinaron exitosamente las condiciones in vitro para el estudio de VEs producidas por células Swan-71, y se caracterizó tanto el perfil basal de secreción de VEs cómo en respuesta a estímulos inflamatorios.

Palabras clave: TROFOBLASTO, VESÍCULAS EXTRACELULARES, NTA, ESTÍMULOS INFLAMATORIOS.