O9 - Bacterias

Caracterización química y biológica de fracciones bioactivas producidas por la microbiota comensal de glándula mamaria frente a S. aureus

De Lillo, María Florencia ¹ - Isaac, Paula ^1,2 - Orellano, María Soledad ³ - Bohl Luciana Paola ^1,2 - Breser, María Laura ^1,2 - Calvinho, Luis Fernando ⁴ - Porporatto, Carina ¹

1) Instituto Multidisciplinario de Investigación y Transferencia Agroalimentaria y Biotecnológica (IMITAB,CONICET-UNVM), Villa María, Córdoba, Argentina
2) Instituto Académico Pedagógico de Ciencias Básicas y Aplicadas, Universidad Nacional Villa María, Villa María, Córdoba, Argentina
3) Basque Center for Macromolecular Design and Engineering POLYMAT-UPV, San Sebastián, Guipúzcoa, España
4) Departamento de Clínicas, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral, Esperanza, Santa Fe, Argentina
Contacto: florencia.delillo@gmail.com

La mastitis bovina (MB) es la principal enfermedad del ganado lechero y causa importantes pérdidas económicas. Staphylococcus aureus, su principal agente causal, expresa múltiples factores de virulencia que favorecen la colonización intramamaria, la evasión del sistema inmune y la persistencia en el huesped.
La microbiota comensal de la glándula mamaria es una fuente prometedora para el desarrollo de terapias antivirulentas, como alternativa o complemento a los tratamientos convencionales. Las estructuras bioactivas que producen como mecanismo de defensa pueden aprovecharse biotecnológicamente como alternativas sustentables, viables y con menor riesgo de generar resistencia. El objetivo de este estudio fue evaluar la actividad antibiofilm y caracterizar fisicoquímicamente fracciones bioactivas derivadas del sobrenadante libre de células (CFS) de Staphylococcus chromogenes LN1 frente a S. aureus V329 patógeno de referencia en infecciones intramamarias.
El CFS de Staphylococcus chromogenes LN1, aislado de muestras de leche de animales sanos sin antecentes de mastitis, mostró actividad antibiofilm no bactericida contra S. aureus V329. Dos fracciones parcialmente purificadas, obtenidas por precipitación con acetona (PA) y diálisis (D-14), mantuvieron esta actividad, con reducciones de biomasa del biofilm de hasta el 50% en las concentraciones más altas sin presentar efectos citotóxicos en células epiteliales bovinas.
La microscopía de fuerza atómica (AFM) y dispersión dinámica de luz (DLS) revelaron que el CFS contiene nanoestructuras polidispersas, mientras que PA y D-14 presentan partículas más pequeñas y uniformes sugiriendo un enriquecimiento selectivo durante la purificación. Por FTIR se identificaron grupos funcionales como hidroxilo, alquilo, carbonilo y aminas. Tras una ultracentrifugación en gradientes de sacarosa, el CFS pierde actividad al fraccionarse, mientras que PA y D-14 la retienen en los pellets. Ensayos con la sonda DPH detectaron dominios hidrofóbicos compatibles con estructuras de membrana. Estos resultados sugieren que la actividad se asocia a ensamblajes supramoleculares y posiblemente a vesículas extracelulares, cuya integridad es clave. Actualmente se trabaja en la optimización de métodos de aislamiento para preservarlas, en su caracterización química y aplicación en infecciones intramamarias. 

Palabras clave: MICROBIOTA - BIOCOMPUESTOS - MASTITIS BOVINA - FACTORES DE VIRULENCIA