Vesicular stomatitis virus induces apoptosis at early stages in the viral cycle and does not depend on virus replication
Patricia Gadaleta, Marina Vacotto and Félix Coulombié. Laboratorio de Virología.
Abstract
We detected apoptosis induction in some vesicular stomatitis virus (VSV) infected mammalian cells: Vero-76, Cos-7, and BHK-21. Cell lines were analized by chromosomal DNA fragmentation and nuclear morphology. In order to determine the step in the viral cycle at which apoptosis of infected cells is triggered, chemical and physical agents were used to block viral infection at different times and then, the apoptotic response of infected cells was examined. The treatment of Vero-76 infected cells with a lysosomotrophic agent, such as NH4Cl, was shown to abrogate virus apoptosis induction. On the other hand, VSV-induced apoptosis was not blocked by the presence of cycloheximide, suggesting that the de novo viral protein synthesis is not required for this process. Besides, UV-inactivated viruses were also capable of inducing apoptosis in Vero-76 cells, indicating that the activation of a programmed cell death process by VSV does not require viral replication. Hence, these findings indicate that VSV induces apoptosis at early stages of viral infection.
El virus de la estomatitis vesicular induce apoptosis tempranamente en el ciclo viral y no requiere de la replicación del mismo.
Patricia Gadaleta, Marina Vacotto, Félix Coulombié. Laboratorio de Virología.
Resumen
El virus de la estomatitis vesicular (VSV) es el prototipo de la familia Rhabdoviridae al cual pertenece el virus de la rabia. Con el objeto de estudiar la respuesta apoptótica in vitro y su relación con la multiplicación viral hemos ensayado la inducción de apoptosis en distintos cultivos de células de mamíferos. Cultivos infectados de células Vero-76, Cos-7 y BHK-21 fueron analizados respecto de la fragmentación del ADN cromosomal y la morfología nuclear. Con el fin de determinar el momento del ciclo viral en el cual el proceso de apoptosis se dispara, utilizamos agentes químicos y físicos que bloquean la infección en diferentes etapas de la infección. El tratamiento de células Vero-76 infectadas con VSV con un agente lisosomotrópico que inhibe el desnudamiento viral inhibió la apoptosis inducida por el virus, sugiriendo que el proceso se inicia luego de la entrada del virus a la célula por endocitosis y este debe desnudarse en el citoplasma celular. Por otro lado, el tratamiento con cicloheximida no mostró efecto alguno, indicando que la síntesis de novo de proteínas celulares y/o virales no es necesaria para la inducción de apoptosis. Por último, se observó que partículas inactivadas con luz ultravioleta, incapaces de transcribir y replicar inducen apoptosis en células Vero-76 indicando la independencia del proceso de apoptosis de la replicación viral. Los resultados en su conjunto indican que el virus induce apoptosis tempranamente en el ciclo viral.