TRANSFECCIÓN PARA LA PRODUCCIÓN DE MCP-1 (MONOCYTE CHEMOTACTIC PROTEIN-1) DE UNA LÍNEA DE MELANOMA HUMANO: ANÁLISIS IN VIVO E IN VITRO DE SU CAPACIDAD QUIMIOTÁCTICA SOBRE DIFERENTES CÉLULAS MONONUCLEARES

Gazzaniga Silvina1, Bravo Alicia I2, Maschi F3, Mordoh José4, Wainstok Rosa1.

1Dpto. de Química Biológica, FCEyN, UBA; 2Hospital Eva Perón, Buenos Aires; 3Fac. Cs. Veterinarias, LaPlata, 4IIB-Fundación Campomar. sgazzaniga@hotmail.com

Hemos demostrado previamente que el infiltrado inflamatorio presente en una línea de melanoma humano crecido en ratones “nude” puede ser potenciado por la inducción de necrosis tumoral y que la inyección de la citoquina GM-CSF aumenta la presencia de macrófagos y células polimorfonucleares intratumorales. El MCP-1 es una quemoquina con capacidad de reclutar principalmente monocitos y células NK, y se ha visto que es producida por muchos tipos de tumores, aunque su rol en la progresión y desarrollo tumoral no es muy claro aún. Con el propósito de extender nuestros estudios, transfectamos la línea de melanoma IIB-MEL-J (no productora de MCP-1) con un vector de expresión (plxsn) portador del cDNA para el MCP-1 humano. Se obtuvo una sublínea productora de 940 pg/ml. A esta concentración, por ensayos de quimiotaxis, monocitos humanos se tornan un 30% más migratorios y células dendríticas inmaduras se evidencian altamente móviles (70-90% más que los controles). La inyección subcutánea de esta sublínea en ratones “nude” promueve un aumento moderado de macrófagos y células mononucleares a los 4 días post inoculación. Hacia el día 11, la persistencia de macrófagos es acompañada de edema y numerosos fibroblastos. Tales manifestaciones estuvieron ausentes en la línea tumoral parental. En consecuencia, esta sublínea productora de MCP-1 será empleada para extender nuestros estudios sobre la modulación del infiltrado inflamatorio en el sitio tumoral en este tipo de tumores.

We have previously shown that inflammatory infiltrate in human melanoma growing in nude mice can be enhanced by induction of tumor necrosis and that GM-CSF injection increased intratumoral macrophages and polimorphonuclear cells. MCP-1 is a chemokine with capacity to recruit mainly monocytes and NK cells, and it was reported to be produced by many tumor types, although its role in tumor progression and development is less clear. The IIB-MEL-J human melanoma cell line employed in our previous work was negative for MCP-1 production. With the purpose to extend those studies, we transfected this tumor line with an expression vector (plxsn) carrying human MCP-1 cDNA. A subline producing 940 pg/ml MCP-1 was obtained. At this concentration, MCP-1 renders monocytes 30% more migratory and immature dendritic cells highly motile (70-90% more than controls) by in vitro chemotaxis assays. Subcutaneous injection of this MCP-1-producing melanoma line in nude mice promoted moderate increase in peritumoral macrophages and mononuclear cells 4 days post inoculation. By day 11, the persistence of macrophages was accompanied by edema and numerous fibroblasts. Such events were absent in the parental tumor. Consequently, the MCP-1-producing melanoma line will be employed to extend our studies on modulation of inflammatory cells infiltration at the tumor site.